PCR 扩增的 DNA 为基础的产品用一对引物:
五′-CCTTACGTCAGTGGAGATGTCACATC-3′;
五′-TGCCCGCTTCCAACCAATGCCTAAAGA-3′.
每个 PCR 混合物最终体积为 25 µl: 67 mM tris-HCl pH 8,6 在 25°C; 2,5 mM 氯化镁; 16,6 mM 硫酸铵; 总浓度为 300 µM 的 dNTP 混合物; 底漆混合 0,每个 5 µM; 2,第 5 版. Taq DNA 聚合酶和质粒 DNA 模板 25 ng. 包括聚合酶链反应温度控制:
在 94 ° c 的初始变性 – 3 分钟;
30 个周期: 94°C - 30 秒, 62°С - 30 秒, 72°С - 40 秒;
最终合成在 72°C 下进行 5 分钟.
聚合酶链反应- 通过使用清洁套装使用 SiO2 磁性粒子从引物和 PCR 反应组分提纯产物 ("燧石", 俄罗斯) 根据制造商的建议. 使用了 10 µl 结合能力为 10 µg DNA 的磁性颗粒. 在 50 µl 洗脱缓冲液中洗脱 DNA.
第2步. 获得 mŠÈI 谱 DNA 产品.
将一滴体积为 25 µl 的 PCR 产物水溶液加到干净的载玻片上，用 LGN-303 氦氖激光束探测 3 分钟。. 及以上. 收到二次调制的宽带电磁辐射 (mŠÈI) 使用频率为 700 kHz 的晶体管收音机录制并以波形格式转换为声音. 此音频文件，我们建议你使用介绍 DNA 信息 (无需使用, 此版本的, 激光 LGN 303) 在样品无菌水, 铭记, 那声音可以携带扭转 http 信息://www.efir.com.ua/rus/a.php?r = 2&d = 69 , 包括 DNA (假设).
一个带有试管的架子被放置在距离激光器 15-20 厘米的地方。, 包含纯蒸馏水无杂质 DNA, RNA 和 nukleaz. 水被冻结在-20 ° c 和 razmorožena 在室温 (融化的水).
第 3 步. 使用水样本中的 PCR 扩增, 处理原始 DNA mŠÈI 系列, 其中阅读信息激光 LGN 303
激光的照射后水, 加工的 mŠÈI 范围, 用于在 25 µl 体积中建立标准 PCR 反应，无需添加真正的 DNA 模板. 将装有试管的架子放置在距激光器 20-30 厘米的位置. 在无菌箱放置 PCR 反应进行, 处理 UV 光, 这可以防止样品污染.
包含每个 PCR 混合物: 67 mM tris-HCl pH 8,6 在 25°C; 2,5 mM 氯化镁; 16,6 mM 硫酸铵; 总浓度为 300 µM 的 dNTP 混合物; 底漆混合 0,每个 5 µM; 2,第 5 版. Taq DNA 聚合酶. 使用几个温度聚合酶链反应, 不同时间阶段的断裂伸长率 (合成) 在 72 ° c 的 DNA 链.
包括原始的聚合酶链反应温度控制:
94°C 初始变性 - 3 分钟。;
40 个循环: 94°C - 30 秒, 62°С - 30 秒, 72°С - 40 秒;
最终合成在 72°C 下进行 5 分钟.
包括的改性聚合酶链反应温度控制:
94°C 初始变性 - 3 分钟。;
40 个循环: 94°C - 30 秒, 62°С - 30 秒, 72°С - 2-7 分钟。;
最终合成在 72°C 下进行 5-7 分钟.
所有的温度制度导致合成的 PCR 产物指定长度, 但在不同程度上. 在 40 个 PCR 循环的每个循环中，使用 7 分钟的 DNA 链合成观察到目标产物的最大数量的实验样品。.
第4步. Pcr 检测结果分析
混合与凝胶的缓冲区的 PCR 反应样品完成后, 含有荧光染料荧光绿岛 ("燧石", 俄罗斯) 并在 1 中进行了分析,根据凝胶电泳标准方法在单一 TBE 缓冲液中使用 5% 琼脂糖凝胶. 在波长为 365 nm 的透照仪上分析结果. 积极的思想样品, 在类似的距离从一开始的乐队, 这和地带阳性对照, 对应于 547 bp 的 DNA 片段大小.
实验标本均进行基因测序, 阳性对照样品 PCR 和 DNA 样品，源产品, 与使激光的阅读. 测序揭示, 实验样品在 99,与原始产品 DNA 序列 2-100% 相同, 这使得阅读激光.
作为阐述我们的实验之一，看看图片 PCR DNA 幻影. 700kGc 还提供录音 mŠÈI DNA 中的频率的波形格式.
链接到下载录音波格式 DNA
声音 547 bp. [按钮链接=”http://files.mail.ru/A59F39CE29C04CD180132D8885580905″ 文本 =”下载”]
PS: 我们的实验，你可以玩无需使用激光. 而原始的 DNA 矩阵 (我们也一样), 即. 不合成矩阵. 这将确保对原始 DNA 的工作用水管意外关闭, 移液器，等等。. 因此我们去从 kontaminacij. 在这个版本中，我们将工作声音播放器安装在距离机架 1 到 20 厘米的位置，并带有试管. 曝光时间可以从 5 分钟或更长. 身份形成 DNA PCR 产物和原始的 DNA DNA 测序，获得可以设置. 在此版本的测试足够的引物和知识一致性
原始的 DNA 核苷酸.
Gariaev 皮皮岛.
D.b.s., 学会. RANS, RAMTN 和列表, TSP 问题. 纽约 EN.
科学的量子遗传学研究所所长
