PCR 擴增的 DNA 為基礎的產品用一對引物:
五′-CCTTACGTCAGTGGAGATGTCACATC-3′;
五′-TGCCCGCTTCCAAACCAATGCCTAAAGA-3′.
每個PCR混合物的25μl終體積中包含: 67毫摩爾Tris-鹽酸pH 8的,6，在25℃; 2,5mM氯化鎂; 16,6毫硫酸銨; 在300的總濃度的dNTP混合物UM; 引物混合物為0,每5 UM; 2,5個單位. 25納克的Taq DNA聚合酶和質粒DNA模板. 包括聚合酶鏈反應溫度控制:
在 94 ° c 的初始變性 – 3分鐘。;
30個循環: 94℃ - 30, 62℃ - 30, 72℃ - 40;
在72℃下最終合成5分鐘.
聚合酶鏈反應- 通過使用清潔套裝使用 SiO2 磁性粒子從引物和 PCR 反應組分提純產物 ("燧石", РОССИЯ) 根據製造商的建議. 我們使用10升磁性顆粒具有10微克DNA的結合能力. DNA的洗脫在洗脫緩衝液的50微升的體積進行.
第2步. 獲得 mŠÈI 譜 DNA 產品.
在25微升的體積含水PCR產物溶液一滴施加到一個乾淨的顯微鏡載片，並用於LGN-303 3 min的氦氖激光器的探測光束. 及以上. 收到二次調製的寬頻電磁輻射 (mŠÈI) 記錄晶體管收音機，在700千赫茲的頻率並轉換成聲波格式. 此音訊檔，我們建議你使用介紹 DNA 資訊 (無需使用, 此版本的, 鐳射 LGN 303) 在樣品無菌水, 銘記, 那聲音可以攜帶扭轉 HTTP 資訊://www.efir.com.ua/rus/a.php?r = 2&d = 69 , 包括 DNA (假設).
在15-20厘米從激光三角架與管放置在距離, 包含純蒸餾水無雜質 DNA, RNA 和 nukleaz. 水被凍結在-20 ° c 和 razmorožena 在室溫 (融化的水).
第3步. 使用水樣本中的 PCR 擴增, 處理原始 DNA mŠÈI 系列, 其中閱讀資訊鐳射 LGN 303
鐳射的照射後水, 加工的 mŠÈI 範圍, 用於生產標準的PCR反應，在體積25微升的無添加真實的模板DNA. 三角架管從激光放置在20-30厘米的距離. 在無菌箱放置 PCR 反應進行, 處理 UV 光, 這可以防止樣品污染.
包含每個 PCR 混合物: 67毫摩爾Tris-鹽酸pH 8的,6，在25℃; 2,5mM氯化鎂; 16,6毫硫酸銨; 在300的總濃度的dNTP混合物UM; 引物混合物為0,每5 UM; 2,5個單位. Taq DNA 聚合酶. 使用幾個溫度聚合酶鏈反應, 不同時間階段的斷裂伸長率 (合成) 在 72 ° c 的 DNA 鏈.
包括原始的聚合酶鏈反應溫度控制:
3分鐘 - 在94℃下初始變性。;
40個循環: 94℃ - 30, 62℃ - 30, 72℃ - 40;
在72℃下最終合成5分鐘.
包括的改性聚合酶鏈反應溫度控制:
3分鐘 - 在94℃下初始變性。;
40個循環: 94℃ - 30, 62℃ - 30, 72℃ - 2-7分鐘。;
在72℃下最終合成5-7分鐘.
所有的溫度制度導致合成的 PCR 產物指定長度, 但在不同程度上. 使用每個的40個PCR循環7分鐘的DNA鏈的合成，觀察到所期望的產物的測試樣品的最大數.
第4步. Pcr 檢測結果分析
混合與凝膠的緩衝區的 PCR 反應樣品完成後, 含有螢光染料螢光綠島 ("燧石", РОССИЯ) 並分析在1,5％的瓊脂糖通過在TBE緩衝液中的單凝膠電泳的標準方法凝膠. 結果在365nm上的透分析. 積極的思想樣品, 在類似的距離從一開始的樂隊, 這和地帶陽性對照, 547鹼基對適當大小的DNA片段.
實驗標本均進行基因測序, 陽性對照樣品 PCR 和 DNA 樣品，源產品, 與使鐳射的閱讀. 測序揭示, 實驗樣品99,2-100％到原始DNA序列產物相同, 這使得閱讀鐳射.
作為闡述我們的實驗之一，看看圖片 PCR DNA 幻影. 700kGc 還提供錄音 mŠÈI DNA 中的頻率的波形格式.
連結到下載錄音波格式 DNA
聲音547 o.n. [按鈕鏈接=”HTTP://files.mail.ru/A59F39CE29C04CD180132D8885580905″ 文本 =”下載”]
PS: 我們的實驗，你可以玩無需使用鐳射. 而原始的 DNA 矩陣 (我們也一樣), 即. 不合成矩陣. 這將確保對原始 DNA 的工作用水管意外關閉, 移液器，等等。. 因此我們去從 kontaminacij. 在本實施例中，音頻播放器的工作集在距離為1〜20厘米從與所述三腳架試管. 暴露時間可以在5分鐘，最大之間變化. 身份形成 DNA PCR 產物和原始的 DNA DNA 測序，獲得可以設置. 在此版本的測試足夠的引物和知識一致性
原始的 DNA 核苷酸.
Gariaev 皮皮島.
D.b.s., 學會. RANS, RAMTN 和清單, TSP 問題. 紐約 EN.
科學的量子遺傳學研究所所長
