PCR の製品の DNA ベースの増幅プライマーのペアを使用:
5′-CCTTACGTCAGTGGAGATGTCACATC-3′;
5′-TGCCCGCTTCCAAACCAATGCCTAAAGA-3′.
各PCR混合物を、25μlの最終容量は含まれていました: 67 mMトリス塩酸pHが8,25℃で6; 2,5mMの塩化マグネシウム; 16,6mMの硫酸アンモニウム; 300μMの合計濃度でのdNTP混合物; 0へのプライマーミックス,5μMの各; 2,5台. Taq DNAポリメラーゼおよび25 ngのプラスミドDNAテンプレート. 含まれている PCR 温度コントロール:
初期変性 94 ° c – 3分。;
30サイクル: 94°C - 30、, 62°C - 30、, 72°C - 40と;
5分間72℃で最終合成.
PCR- 製品は、SiO2 磁性粒子を用いたクリーニング キットを使用してプライマーと PCR 反応コンポーネントから精製しました。 (「Silex」, ロシア) 製造元の推奨事項に従って. 我々は、結合能力10μgのDNAと磁性粒子10リットルを使用しています. DNAの溶出は、溶出緩衝液の50μlの体積で行いました.
ステップ2. MŠÈI スペクトル DNA 製品を得ること.
25μlの量の水性PCR産物溶液の滴が清浄な顕微鏡スライドに塗布し、LGN-303 3分のヘリウムネオンレーザーのビームをプローブするために使用しました。. 以上. 二次変調広帯域電磁波を受信 (mŠÈI) 700キロヘルツの周波数でトランジスタラジオを記録し、音波形式に変換. このオーディオ ファイルを提案する DNA 情報の紹介に使う (使用せず, このバージョンの, レーザー LGN-303) サンプルの滅菌水で, 心のこと, その音は、ねじり http 情報を運ぶことができます。://www.efir.com.ua/rus/a.php?r = 2&d = 69 , DNA を含む (仮説).
配置された管を有するレーザー三脚15〜20センチメートルの距離で, DNA の不純物のない蒸留水精製を含む, RNA と nukleaz. -20 ° c で室温で razmorožena 水が凍っていた以前 (水を溶かす).
ステップ3. 水のサンプルを使用して PCR 増幅, 元の DNA の mŠÈI 範囲を処理, 読書情報レーザー LGN 303
レーザーへの露出の後の水します。, mŠÈI 加工範囲, 実際のテンプレートDNAを添加せずに、標準的なPCR反応、体積で25μlのの製造のために使用. レーザ20〜30センチの距離に配置された三脚管. 滅菌ボックスで実施の PCR の反作用の配置, 紫外線を処理, サンプルの汚染を防止します。.
含まれている各 PCR の混合物: 67 mMトリス塩酸pHが8,25℃で6; 2,5mMの塩化マグネシウム; 16,6mMの硫酸アンモニウム; 300μMの合計濃度でのdNTP混合物; 0へのプライマーミックス,5μMの各; 2,5台. Taq DNA ポリメラーゼ. いくつかの温度 PCR を使用, 伸長の異なる期間相 (合成) 72 ° c の DNA の鎖.
含まれている元の PCR 温度コントロール:
94℃での初期変性 - 3分。;
40サイクル: 94°C - 30、, 62°C - 30、, 72°C - 40と;
5分間72℃で最終合成.
含まれている修正された PCR 温度コントロール:
94℃での初期変性 - 3分。;
40サイクル: 94°C - 30、, 62°C - 30、, 72°Cの - 2-7分。;
5-7分間72°Cでの最終合成.
指定された PCR 産物の合成につながったすべての温度の政体の長さ, さまざまなレベルで. 予想される生成物の試験片の最大数は40 PCRサイクルの各7分間のDNA鎖の合成を用いて観察されました.
ステップ4. PCR の結果の分析
PCR 反作用のサンプルが混合ゲルのバッファーの完了後, 蛍光色素を含むサイバー グリーンします。 (「Silex」, ロシア) そして1で分析,TBEバッファー単独でのゲル電気泳動の標準的な方法によって、5％アガロースゲル. 結果は、365 nmのトランスイルミネーター上で分析しました. 肯定的な思考のサンプル, 最初から同じような距離にあったバンド, そのストリップの肯定的な制御, 547塩基対の適当なサイズのDNA断片.
実験サンプルが施されたシーケンス, 肯定的な制御サンプル ソース製品、PCR、DNA サンプルします。, レーザーの読書をしたと. シーケンスを明らかにしました。, 実験試料99,元のDNA配列産物と同一で2から100パーセント, レーザーの読書をしました。.
我々 の実験の 1 つの例として画像 PCR DNA ファントムを参照してください。. MŠÈI DNA を周波数を wave 形式で録音音 700kGc も提供します。.
録音 wave 形式 DNA をダウンロードへのリンクします。
サウンド547 o.n. [ボタンリンク=”http://files.mail.ru/A59F39CE29C04CD180132D8885580905″ テキスト =”ダウンロード”]
PS: レーザーを使わず遊べる実験. 元の DNA 行列なし (また皆さんに), すなわち. 行列を合成できません。. 水チューブでの作業で元の DNA の偶然の閉鎖に対してこう, ピペット等。. したがって、我々 は kontaminacij から行く. 本実施形態では、オーディオプレーヤーは三脚で試験管から1〜20センチメートルの距離にワーキングセット. 露光時間は5分と最高の間で変動し得ます. アイデンティティ形成 DNA PCR の製品および得られた元の DNA シーケンスの DNA を設定できます。. このバージョンのテストで十分なプライマーおよび知識整合性
元の DNA ヌクレオチド.
Pp の Gariaev.
ドデシルベンゼンスル, 防衛大. 乱, RAMTN とリスト, 小さじ. ニューヨーク EN.
量子遺伝学研究所の科学的なディレクター
