Materializacji cząsteczek DNA

Dla PCR amplifikacja DNA-oparty produkt używany parę podkłady:
5′-CCTTACGTCAGTGGAGATGTCACATC-3′;
5′-TGCCCGCTTCCAAACCAATGCCTAAAGA-3′.
Każdą mieszaninę PCR 25 ul objętość końcowa zawarta: 67 mM Tris-HCl, pH 8,6 w temperaturze 25 ° C; 2,5 mM chlorku magnezu; 16,6 mM siarczan amonu; Mieszanina dNTP przy całkowitym stężeniu 300 pM; podkład mix 0,5 | iM każdy; 2,5 jednostek. Polimeraza plazmidowy matrycy DNA Taq DNA 25 ng. Kontrola temperatury PCR zawarte:
wstępnej denaturacji w temperaturze 94° c – 3 min.;
30 cykli: 94 ° C - 30, 62 ° C - 30, 72 ° C - 40 z;
końcowy syntezy w temperaturze 72 ° C przez 5 minut,.
PCR- produkt został oczyszczony z podkłady i składników reakcji PCR przy użyciu zestaw do czyszczenia przy użyciu SiO2-magnetycznych cząstek ("Silex", Rosja) zgodnie z zaleceniami producenta. Mamy przy użyciu 10 L cząstek magnetycznych z zdolność wiązania 10 ug DNA. Wymywanie DNA przeprowadzono w objętości 50 ul buforu do elucji.

krok 2. Coraz mŠÈI spektrum DNA produktu.
Kropla wodnego roztworu produktu PCR w objętości 25 ul naniesiono na czyste szkiełku mikroskopowym i stosowano do badania wiązki lasera HeNe LGN-303 3 min. I powyżej. Otrzymał wtórne modulowanego szerokopasmowego promieniowania elektromagnetycznego (mŠÈI) radiowych na tranzystor przy częstotliwości 700 kHz i przekształcono w postaci fali akustycznej. Ten plik audio, sugerujemy, że umożliwia wprowadzenie informacji na temat DNA (bez użycia, Ta wersja, Laserowy LGN-303) w sterylnej wodzie próbek, mając na uwadze, że dźwięk można nosić skręcanie http informacje://www.efir.com.ua/rus/a.php?r = 2&d = 69 , łącznie z DNA (Hipoteza).
W odległości około 15-20 cm od statywu laserowego z rur umieszczonych, zawierające oczyszczone destylowanej wody bez zanieczyszczeń DNA, RNA i nukleaz. Woda była poprzednio zamrożone w temperaturze-20 ° c i razmorožena w temperaturze pokojowej (stopić wody).

etap 3,. Amplifikacji PCR przy użyciu próbek wody, przetworzone mŠÈI zakres oryginalny DNA, które informacje czytanie laserowe LGN-303
Po ekspozycji na laserowe wody, przetworzone mŠÈI zakres, stosuje się do wytwarzania standardowych reakcji PCR, w objętości 25 | il bez dodatku matrycowego DNA rzeczywistego. Statyw rurki umieszczone w odległości 20-30 cm od lasera. Wprowadzenie do reakcji PCR przeprowadzone w sterylnych pole, przetworzone światło UV, co zapobiega zakażeniu próbek.
Każdej mieszaniny PCR zawarte: 67 mM Tris-HCl, pH 8,6 w temperaturze 25 ° C; 2,5 mM chlorku magnezu; 16,6 mM siarczan amonu; Mieszanina dNTP przy całkowitym stężeniu 300 pM; podkład mix 0,5 | iM każdy; 2,5 jednostek. Taq DNA polimerazy. Używane kilka temperatura reakcji PCR, różne czas trwania fazy wydłużenie (Synteza) nici DNA w temperaturze 72° c.
Oryginalny sterowania temperatury PCR w zestawie:
początkowej denaturacji w temperaturze 94 ° C - 3 minuty.;
40 cykli: 94 ° C - 30, 62 ° C - 30, 72 ° C - 40 z;
końcowy syntezy w temperaturze 72 ° C przez 5 minut,.
Zmodyfikowany regulacja temperatury PCR zawarte:
początkowej denaturacji w temperaturze 94 ° C - 3 minuty.;
40 cykli: 94 ° C - 30, 62 ° C - 30, 72 ° C - 2-7 min.;
końcowy syntezy w temperaturze 72 ° C przez 5-7 minut.
Wszystkie reżimy temperatur doprowadziły do syntezy produktu PCR określona długość, ale w różnym stopniu,. Zaobserwowano, że największa liczba próbek oczekiwanego produktu przy użyciu 7 minut syntezę nici DNA w każdej z 40 cykli PCR.

krok 4. Analiza wyników PCR
Po zakończeniu reakcji PCR próbek miesza się z bufora do żelu, zawierające barwnikiem fluorescencyjnym SYBR Green I ("Silex", Rosja) i analizowano w 1,5% żelu agarozowym standardowymi metodami elektroforezy żelowej w buforze TBE pojedyncze. Wyniki analizowano transiluminatora przy 365 nm. Pozytywne myślenie próbek, zespoły, które były w podobnej odległości od początku, że i kontroli dodatniej Strip, odpowiedni fragment DNA wielkości 547 bp.
Eksperymentalne próbek poddano sekwencjonowania, kontroli pozytywnej próbki DNA i PCR próbek, źródła produktu, z których dokonuje odczytu lasera. Sekwencjonowanie ujawniły, Próbki doświadczalne 99,2-100% identyczna z sekwencją DNA produkt wyjściowy, który się czytanie laserowe.
Jako ilustrację jednego z naszych doświadczeń zobacz obraz PCR DNA Fantomy. Nagrania mŠÈI DNA w formacie wave na częstotliwości dźwięku 700kGc zapewnia również.

Link do pobrania rejestracji dźwięku wave format DNA
Brzmieć 547 o.n. [Przycisk link =”http://files.mail.ru/A59F39CE29C04CD180132D8885580905″ tekst =”Pobierz za darmo”]

PS: Nasze doświadczenia, można grać bez użycia lasera. I bez oryginalnej matrycy DNA (jak również robimy), czyli. nie syntezy macierzy. Gwarantuje to przed przypadkowym zamknięciem oryginalny DNA w pracy z wody rury, pipety, itp.. W ten sposób możemy przejść od kontaminacij. W tym przykładzie realizacji, odtwarzacz audio ustawione Praca w odstępie od 1 do 20 cm, z probówek statywu. Czas ekspozycji może się różnić od 5 minut do góry. Tożsamość powstały produkt DNA PCR i zestaw oryginalny DNA Sekwencjonowanie DNA, uzyskane. W tej wersji testu tyle podkłady i spójności wiedzy
oryginalny DNA Nukleotydy.

Gariaev P.p..
D.b.s., PLIK ACAD.. RANS, RAMTN i listy, ŁYŻECZKA. Nowy Jork pl.
Dyrektor naukowy Instytutu kwantowej genetyki